氨基酸分析法概述

           根據(jù)氨基酸組成分析可以對蛋白質(zhì)及肽進行鑒別，氨基酸分析法可用于確定蛋白質(zhì)、肽及氨基酸的含量，及測定可能存在于 蛋白質(zhì)及肽中的非典型氨基酸。進行氨基酸分析前，必須將蛋白質(zhì)及肽水解成單個氨基酸，具體水解方法由各品種項下規(guī)定。蛋白質(zhì)及肽水解后，其氨基酸分析過程 與用于其他藥物制劑中游離氨基酸的分析過程相同。

    本法包括四種柱前衍生法，分別為異硫氰酸苯酯（PITC）法、6-氨基喹啉－N－羥基琥珀酰亞氨基氨基甲酸酯 （AQC）法、鄰苯二醛（OPA）和9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC）法、2，4-二硝基氟苯（DNFB）法，以及一種茚三酮柱后衍生法。不同的品種應(yīng)針 對自身所含的氨基酸種類及各氨基酸的含量選擇適宜的氨基酸分析方法并做相應(yīng)的方法學驗證。

    由于本法衍生過程中衍生溶液量較少，且容易揮發(fā)，外標法極易出現(xiàn)較大的誤差，建議采用內(nèi)標法進行測定，內(nèi)標的確定由 各品種項下規(guī)定。在本法中，由于半胱氨酸或胱氨酸的衍生產(chǎn)物不穩(wěn)定，因此對于含半胱氨酸或胱氨酸的樣品衍生后應(yīng)盡快測定，或者在衍生前對半胱氨酸或胱氨酸 進行適當?shù)奶幚恚蛊滢D(zhuǎn)化為穩(wěn)定地產(chǎn)物（如磺基丙氨酸或半胱氨酸-硫代丙酸）后再衍生測定，具體方法由各品種項下規(guī)定。在測定過程中，可根據(jù)所用的儀器、 色譜柱品牌、色譜柱的長度及要分離的氨基酸種類，對流動相的有機溶劑和洗脫梯度作適當調(diào)整以獲得較好的分離度。